轮回肿瘤 DNA（ctDNA）通过完了对可操作突变的非侵入性、颖悟识别，澈底改变了肺癌的分子会诊。可是，由于肿瘤零散的互异，ctDNA 分析可能具有挑战性，导致假阴性服从。本商量旨在证据肺癌患者的临床特征了解 ctDNA 零散的决定身分，以便在临床现实中安排 ctDNA 分析时更好地讲明要筹议的假阴性服从。诊治前采集 EGFR 突变（mEGFR）IV 期 NSCLC 患者的血液样本，并监测直至疾病进展。通过圭表形态评估组织样本的 EGFR 状况赌钱赚钱app，在基线和第一次再行评估时使用 dPCR 检测 ctDNA EGFR 状况。在疾病进展时使用 NGS 评估患者的突变状况。共蚁合 40 例 mEGFR 组织样本。在驱动一线诊治之前，对血浆样本进行 mEGFR 分析，65% 的患者 ctDNA 检测到 mEGFR（“零散者”）。较高的 ECOG PS（p = 0.04）、双侧位置的原发肿瘤（p = 0.04）以及同期存在胸腔内/胸腔外疾病（p = 0.05）与 mEGFR 零散干系。零散者的 PFS 短于非零散者（p = 0.03）。第一次影像学评估时 ctDNA 检测到 mEGFR 的患者 PFS 短于 ctDNA 断根患者（p = 0.05）。咱们的初步数据标明，特定的临床特征可瞻望 NSCLC mEGFR ctDNA 零散，教导对于临床现实中了解潜在的假阴性服从和符合申诉具有潜在的临床适用性。

商量布景

表皮滋长因子受体（EGFR）突变瑕瑜小细胞肺癌（NSCLC）中最常见的致癌驱动突变之一，在能够 15-40% 的肺腺癌中不雅察到。在编削性 NSCLC 中不雅察到外显子 19-21 突变，包括外显子 19 缺失亚型（ex19del）和 p.L858R，极度是与年青、无抽烟史和女性性别关联 。也曾建造了三代 EGFR 酪氨酸激酶扼制剂（TKI）并引入临床现实，用于诊治 EGFR 突变（mEGFR）肺癌，显赫改善了这些患者的临床结局。不自在的是，患者最终会出现疾病进展。在此布景下，出现了液体活检，成为癌症会诊和监测范围的一种改进性器用，可提供关联肿瘤空间和期间异质性的实时信息，以无创、颖悟的形态和快速盘活期间追踪分子改变。此外，液体活检克服了组织取样的局限性，包括侵入性和可行性，使其在早期肿瘤分子评估中的掌握发生了变化。轮回肿瘤DNA（ctDNA）是指由肿瘤细胞开释并在血浆中轮回的游离DNA（cfDNA），在NSCLC中算作会诊和疾病进展时辰子评估的器用。在癌症患者中发现 ctDNA 水平升高，ctDNA 零散的增多与晚期、编削部位的数目和高肿瘤负荷干系，为了解肿瘤的异质性提供了有价值的成见，增多了新一层的预后信息。此外，在第一次再行评估时 mEGFR隐匿（称为“ctDNA 断根”）的患者比较突变仍然存在的患者，与更好的糊口结局干系。可是，ctDNA 存在局限性和挑战，极度是由于其品貌低，取决于肿瘤的生物学和剖解学特征，这反应在零散的高度互异上。极端低的 ctDNA 零散可导致假阴性服从。尽管引入了高颖悟度的 ctDNA 分析时候，包括下一代测序（NGS）和数字团聚酶链反应（dPCR），但 ctDNA 服从的解读在商量和临床环境中仍然是一个弥留挑战。

在这方面，为了采纳患者进行符合的诊治并在诊治经由中监测他们，在阴性服从的情况下，更好地了解这是真阴性还瑕瑜零散肿瘤，是一个热烈未称心的需求。

因此，本商量旨在通过 ctDNA 分析探讨 mEGFR NSCLC 患者临床特征与其零散状况之间的关联，主见是深远了解个体是否零散的可能性，幸免假阴性的吃力。

商量循序

组织检测披露 EGFR 突变的 IV 期 NSCLC 患者，算作临床现实的一部分，在一线诊治前（基线时）和预定的后续期间点蚁合血液样本，直至疾病进展（PD）。统共患者王人接纳了 EGFR-TKI 吉非替尼、阿法替尼或奥希替尼算作一线诊治。

如若基线时 ctDNA 检测到至少一种激活 mEGFR，则将患者归类为“零散者”，如若基线时 ctDNA 未检测到 EGFR 激活突变，则将其归类为“非零散者”。患者也被分为基线时 ctDNA 阳性、第一次再行评估时转为阴性（断根）的患者，以及保留 mEGFR（未断根）的患者。

基线和第一次再行评估时使用数字 PCR 进行 EGFR 突变分析。疾病进展时，使用NGS进行全面突变分析。突变等位基因的浓度申诉为等位基因分数（AF%）。

商量服从

基线时EGFR-cfDNA分析

本商量纳入了组织检测披露为 IV 级 mEGFR NSCLC且为一线 EGFR-TKI 诊治候选者的患者，在诊治前从这些患者中共蚁合了 40 例血液样本，并使用 dPCR 进行分析。用于会诊的组织采集和液体活检样本之间的中位终止为 34 天（CI 5-56）；组织和液体活检评估之间未驱动诊治。表 1 总结了患者的临床特征。

表1

在基线时，40 例样本中有 26 例（65%）零散 mEGFR ctDNA，14 例（35%）为非零散（表 2）。发现零散状况与 ECOG 体能状况（PS）、原发肿瘤部位以及胸腔内和/或胸腔外疾病的存在之间存在统计学显赫干系性（图 1）。较差的 ECOG PS 水平（2 和 3）（p = 0.04）、双侧位置的原发肿瘤（p = 0.04）以及同期存在胸腔内和胸腔外疾病（p = 0.05）与 mEGFR ctDNA 零散关联。

表2

图1

还发现零散患者与较大肿瘤负荷（> 15 mm，中位阈值）的干系性趋势（p = 0.06）。此外，较大的疾病负荷以及同期存在胸腔内和胸腔外疾病与较高的 mEGFR AF% 干系（鉴识为 p = 0.04 和 p = 0.03）（图 2A）。Logistic 追想披露零散状况与 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤、同期存在胸腔内和胸腔外疾病、较高的肿瘤负荷、较高的 ctDNA AF% 径直干系（图 2A）。其他临床特征（会诊年齿、性别、抽烟史、原发肿瘤大小、位置和编削部位数目）与零散状况无关。已识别的瞻望生物璀璨物的组合，将统共特征纠合在一齐，导致特异性和颖悟度更高的 ctDNA 零散瞻望特征（特异性 91.7%，颖悟度 61.6%，AUC 0.89）（图 2B）。

图2

零散患者的中位 PFS 显赫短于非零散患者（鉴识为 15 个月和 30 个月；p = 0.03）（图 3A）。此外，在零散者中，ctDNA 中 mEGFR AF% 较高（> 0.38，中位阈值）患者的 PFS 短于 AF% 较低（≤ 0.38，中位阈值）患者（鉴识为 8 个月和 35 个月；p = 0.01）（图 3B）。PFS 单变量模子披露，零散状况（HR=0.45；95% CI=0.20-0.98；p = 0.04）与 ECOG PS（HR=1.99；95% CI=1.03-3.82；p = 0.03）显赫干系（图 3D）。在多变量分析中，未证实具有统计学真理的干系性（p = 0.57）。总体而言，65% 的患者基线 ctDNA 披露为 mEGFR 零散者，而况较高的 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤以及胸腔内/胸腔外疾病的存在与 mEGFR 零散的发生关联。

图3

第一次再行评估和疾病进展时EGFR-ctDNA分析

第一次评估时辰析了 35 例患者的 ctDNA。16 例患者（45.7%）血浆 mEGFR 断根，7 例患者（20%）mEGFR 合手续存在。卡方试验披露，断根状况与干系临床特征无显赫干系性。与第一次再行评估时 ctDNA 合手续检测到突变的患者比较，mEGFR 断根的患者披闪现更长的 PFS（鉴识为 17 个月和 7 个月；p = 0.05）（图 3C）。

对 33 例患者进行监测直至疾病进展。通过 NGS 分析这些患者的全面突变谱（表 3）。在基线 EGFR 零散患者中，在 12 例患者中，ctDNA 检测到至少一种 EGFR 突变，在 4 例患者中，mEGFR 与其他突变共存（EGFR ex19del、TP53 p.H193Y 和 KRAS p.Q61H；EGFR ex19del 和 TP53 p.D149Y；p.L858R、MET CNV 和 EGFR CNV），在 2 例患者中发现 EGFR 除外的突变（TP53 p. I251M 和 MET p.M1131F；BRAF p.L485F），5 例患者 ctDNA 阴性。此外，在基线非零散患者中，在 6 例患者中，疾病进展时 ctDNA 检测到至少一种 mEGFR，在 3 例患者中，mEGFR 与其他突变共存（EGFR ex19del 和 TP53 p.D100V；EGFR ex19del、EGFR p.C797S、EGFR p.D384 V、TP53 p.V113 L、MET CNV 和 EGFR CNV；EGFR p.R958H 和 TP53 p.N235H），在 1 例患者中发现 EGFR 除外的突变（CDK6 p. A326G），1 例患者保合手 ctDNA 阴性。

表3

总体而言，检测到临床和功耀眼系改变，包括 EGFR 突变 ex19del（31.1%）、p. C797S（17.8%）、p.T790M（13.3%）、p.L858R（15.6%）、p.L747P（2.2%），其次是 TP53 p.V113L（2.2%）、p.H193Y（2.2%）、p.D149Y（2.2%）、BRAF p.L485F（2.2%）、KRAS p.Q61H（2.2%）、MET CNV（4.5%）和 EGFR CNV（4.5%）（图 4A）。此外，5 例 ctDNA 阳性患者检出真理未明的突变，包括 EGFR p.D384V（1.7%）、EGFR p.R958H（1.7%）、CDK6 p.A326G（1.7%）、MET p.M1131F（1.7%）、TP53 p.D100V（1.7%）、TP53 p.N235D（1.7%）和 TP53 p.I251M（1.7%）（图 4B）。

图4

讨 论

液体活检插足实体瘤（包括 NSCLC）的临床现实，在疾病会诊和 PD 时用于识别瞻望诊治有用和耐药的生物璀璨物，匡助临床大夫采纳诊治循序，极度是一线诊治后其法规。因此，正确通晓息争读液体活检服从极为弥留，尤其是筹议到影响 ctDNA 零散的生物学和临床身分，申诉假阴性服从时。在此布景下，本商量旨在细则与零散状况干系的患者临床特征，以瞻望肿瘤可能是 ctDNA 零散还瑕瑜零散，幸免假阴性服从的吃力。既往商量标明，与NSCLC患者ctDNA零散干系的临床特征包括肿瘤负荷、有丝分裂或代谢活性、组织学类型和肿瘤分级。识别与非零散特征干系的临床身分，对于指令临床大夫了解液体活检服从和采纳最合适的诊治循序极端有用。

本商量纳入了 40 例患者，在基线时蚁合血浆样本并分析 ctDNA。40 例患者中有 26 例（65%）为 mEGFR 零散者，具有特定的临床特征，包括较高的 ECOG PS、双侧位置的原发肿瘤、存在胸腔内/胸腔外疾病和更差的 PFS。

EGFR 零散与较差的临床状况干系（ECOG PS 2 和 3；p = 0.04）。先前的几项商量也曾细则了 mEGFR 肺腺癌患者 ctDNA 存在突变和/或突变数目较高、ECOG PS 水平较差和糊口期较短之间存在关联。此外，证据最近的文件，同期存在胸腔外和胸腔内疾病是 EGFR-ctDNA 零散的临床瞻望因子（p = 0.05）。Jee 过火共事进行的一项商量标明，74% 的肺外疾病 NSCLC 患者ctDNA阳性，而肺内疾病患者只消 40% ctDNA阳性（p < 0.001）。此外，Passiglia 过火共事标明，不管使用哪种时候，与仅胸腔内疾病患者比较，ctDNA 检测在胸腔外疾病 mEGFR NSCLC 患者中的可靠性、高颖悟度（约 80%）和准确性。

与非零散肿瘤比较，mEGFR 零散率更高的NSCLC 原始肿瘤体积和直径更大。相应地，咱们的商量标明，3 例零散者具有双侧位置的肿瘤（p = 0.04），也进展出较大的原发疾病体积（> 33 mm）。此外，与非零散者（> 33 mm，n = 6 vs. ≤ 33 mm，n = 8）比较，大大宗零散者（> 33 mm，n = 16 vs. ≤ 33 mm，n = 10）具有较大的原发性肿瘤。可是，这种互异莫得达到统计学真理，可能是由于本商量中的患者数目有限。此外，在咱们的部队中，还发现了较高疾病负荷与零散状况的干系性趋势（p = 0.06），较高的 AF% 与较大的肿瘤负荷干系（p = 0.04）。事实上，天然高 AF% 教导显赫的肿瘤负荷，但据不雅察，高肿瘤负荷并不一定能瞻望 ctDNA 零散，因为 ctDNA 也受疾病位置（内脏vs骨骼）的影响。几项商量发现，在晚期 NSCLC 患者中，ctDNA mEGFR AF% 与较大的肿瘤负荷干系。在最近的文件中，未发现基线 EGFR 零散状况与临床特征（包括年齿、性别以及编削部位的类型和数目）之间存在其他关联。需要强调的是，编削部位可能显赫影响 NSCLC 患者 ctDNA mEGFR 分析的准确性，即使在肿瘤负荷高的情况下亦然如斯。在咱们的部队中，大大宗同期存在胸腔外和胸腔内疾病的零散患者进展出平凡的受累，包括内脏编削（如肝脏、脾脏和肾上腺），这些部位与零散增多关联。违反，仅存在胸腔内疾病的非零散患者进展出淋趋唱和骨编削，已知为 ctDNA 零散较低部位。对于糊口率，与咱们之前在寂静患者部队（奥希替尼算作二线诊治）中进行的商量一致，该商量发现非零散患者的中位 PFS 更长，为 19.5 个月，而 EGFR 零散患者为 3.7 个月，本商量数据也披露，非零散患者的 PFS 为 30 个月，零散患者为 15 个月。Verzè 过火共事的商量也发现，零散和非零散患者的中位 PFS 存在统计学显赫互异（5 vs. 17 个月；p = 0.05）。此外，在咱们的部队中，与 mEGFR 含量较高的零散者比较，EGFR 突变 AF% 较低的零散患者（AF% ≤ 0.38，阈值）披闪现更好的 PFS（p = 0.01）。与此一致，一项商量披露，ctDNA 中 mEGFR 含量较高的患者（AF% ≥ 6.1，ROC 弧线分析生成的阈值）比较 EGFR 突变量较低的患者，进展出更好的 PFS（鉴识为 17.8 个月和 4.3 个月；p = 0.02）和 OS（鉴识为 23.6 个月和 7.7 个月；p = 0.016）。一项商量将患者分为绝对零散者，界说为同期零散激活突变和 p.T790M 突变的患者，以及仅零散激活突变的患者，服从披露，基线时仅零散激活突变的患者的 PFS 存在统计学显赫互异（鉴识为 5.5 个月和 1.6 个月；p = 0.01）。可是，最近的商量申诉，在单变量模子但非多变量模子中，零散状况和 ECOG PS 亦然 PFS 的瞻望身分。此外，与既往商量一致，不雅察到血浆 EGFR 突变断根的患者结局有较好的趋势（p = 0.05）。可是，莫得临床特征与断根状况干系，可能是由于该亚组分析的患者样本量小。为了全面起见，咱们还查询了 TCGA，发现了有真理的干系性。

算作探索性经营，咱们分析了 EGFR-TKIs 的耐药机制。在总体东说念主群中，33 例患者出现疾病进展，咱们发现这些患者真的王人（81.8%）ctDNA 至少检出一个突变，只消 6 例患者呈阴性。大大宗基线零散者在疾病进展时 ctDNA 保留了至少一个突变（n = 18）。此外，9 例基线未零散患者在进展时得回了至少一个特殊的突变。耐药机制包括 EGFR 突变或触及不同通路。最近的一项商量报说念了 14 例患者同期存在 ex19del 和 p.C797S。少数患者检测到其他临床干系变异，如 BRAF p.L485F、KRAS p.Q61H、MET CNV 和 EGFR CNV。还发现了其他真理不解的突变。其中，EGFR p.R958H 和 p.D384V 突变与胚系 EGFR 干系肺癌关联。可是，当今未申诉这些变异的发生率。在肺癌中，低水平的 CDK6 p.A326G 与较好的预后干系，而在乳头状肾细胞癌中，MET p.M1131T 会增多激酶活性并导致表型沟通。此外，TP53 p.D100V、p.N235D 和 p.I251M 突变在胶质瘤、乳腺癌和儿童期肾上腺皮质癌中被解读为致病突变。

尽管与已发表的文件一致，本商量细则了临床特征和零散状况的干系性，但存在一些局限性。除了分析的样本量小外，本商量的一个局限性是仅在 mEGFR 肿瘤患者中评估零散。这种局限性源于通过 dPCR 评估 ctDNA 中的 EGFR 驱动突变。是以，不排斥这些患者的 ctDNA 中可能存在其他零散突变。因此，一些咱们称为“非零散者”的患者可能是 EGFR 除外突变“零散者”。基线 NGS 评估将提供这些患者更全面的突变特征。可是，为了勤俭资本，在临床现实中统共患者王人进行 NGS 检测并不老是可行的，当需要以较短的盘活期间以较低的资本检测一些生物璀璨物（如 EGFR）时，dPCR 循序可能有所匡助。

可是，分析这组零散患者 ctDNA EGFR 驱动突变可能提供关联要进行的诊治的临床干系信息，EGFR 突变代表靶点。

申诉中引入的肿瘤分数（TF）参数是指 ctDNA 样本中存在的肿瘤开始的遗传物资的比例或数目，处罚假阴性服从的挑战。较高的 TF 识别具有鼓胀 ctDNA 量的样本，教导全面的肿瘤分析，增多与组织检测的一致性。对于液体活检服从阴性的患者，这种循序可能减少对阐发性组织检测的需要，确保实时驱动诊治的信心。总之，这些数据为临床适用性提供了有价值的成见，加强了液体活检对于检测 EGFR 突变状况的弥留作用，冷漠临床大夫和实验室东说念主员仔细筹议 ECOG PS、原发肿瘤的双侧位置以及胸腔内/胸腔外疾病的存在，以便解读阴性服从的 ctDNA 检测。

参考文件：

Martina Ruglioni, Iacopo Petrini, Stefania Crucitta, Andrea Sbrana, Giovanna Irene Luculli, Leila Sadeghi Gol赌钱赚钱app, Carola Forte, Antonio Chella, Christian Rolfo, Romano Danesi, Marzia Del Re, Clinical characteristics of EGFR-ctDNA shedders in EGFR-mutant NSCLC patients, Translational Oncology, Volume 52, 2025, 102228, ISSN 1936-5233, https://doi.org/10.1016/j.tranon.2024.102228.